L’ibridazione in situ con fluorescenza (FISH) costituisce una tecnica efficace per individuare sequenze specifiche di DNA, diagnosticare malattie genetiche, mappare geni e identificare nuovi oncogeni o aberrazioni genetiche che contribuiscono a vari tipi di tumori.
La FISH ha rivoluzionato l’ambito della citogenetica ed è ora riconosciuta come uno strumento diagnostico e di scoperta affidabile nella lotta contro le malattie genetiche.
L’ibridazione in situ con fluorescenza (FISH) è nata dalla scoperta che gli acidi nucleici potevano essere modificati chimicamente per incorporare un aptene come la biotina o la digossigenina, che a sua volta poteva essere rilevato con una molecola segnalatrice marcata con fluorescenza come l’avidina o l’anti-digossigenina.
L’ibridazione in situ con fluorescenza (FISH) rileva siti specifici di sequenze di DNA specifiche in cellule in metafase o interfase; tale tecnica è stata applicata per la prima volta ai cromosomi vegetali da Schwarzacher et al. (1989) e Yamamoto e Mukai (1989).
Il principio di base è l’ibridazione del DNA nucleare di cellule interfase o di cromosomi metafase fissati su un vetrino microscopico con una sonda di acido nucleico; la sonda marcata e il DNA bersaglio vengono miscelati insieme dopo la denaturazione.
Il sistema di rilevamento enzimatico prevede l’uso di un fluorocromo, che emette segnali colorati nel sito di ibridazione.
Nel momento in cui la FISH è stato ampiamente riconosciuta come tecnica di mappatura fisica a supporto del sequenziamento massivo dei nucleotidi nell’ambito del Progetto Genoma Umano, è diventato una tecnica più conveniente e popolare in altri settori della ricerca biologica e medica, tra cui la genetica clinica, le neuroscienze, la medicina riproduttiva, la genomica cellulare e la biologia cromosomica.
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